破译白癜风绝密档案 http://m.39.net/pf/a_6185654.html产品描述使用串联质谱和蛋白组装技术对血浆M蛋白进行从头测序，检测灵敏度为0.mg/ml。产品背景多发性骨髓瘤(MM)是一种以骨髓浆细胞增殖为特征的血液系统恶性肿瘤。在大多数的MM患者中，恶性浆细胞存在游离轻链（sFLC）现象。M蛋白是浆细胞分泌的一种蛋白，常被用于MM患者的治疗和预后诊断检测的标志物。目前用于M蛋白的检测技术有血清蛋白电泳（SPEP）和免疫固定电泳（IFE）,但是两个技术对于M蛋白的检测灵敏度较低，分别为0.5mg/ml和0.1mg/ml，sFLC分析法通过检测血清中游离轻链的κ链和λ链的比值可以将检测灵敏度提升至0.mg/ml，然而以上方法均不足以高效地检测微小残留病变（MRD）。通过蛋白从头测序，M蛋白检测实现了了万分之一的发现能力。样本分析和处理过程通过Melon凝胶IgG纯化法从血清中分离得到IgG型M蛋白，使用LC-MS/MS实施蛋白质组学与质谱分析，短肽经从头测序后进行蛋白组装，确定M蛋白的氨基酸序列信息，并对M蛋白进行定量。服务提供机构RapidNovor公司中国实验室案例ClinicalCancerResearch年7月的题为《Apersonalizedmassspectrometry-basedassaytomonitorM-proteininmultiple2myelomapatients(EasyM）》针对26名多发性骨髓瘤患者的血清样本，通过质谱对血清中的M蛋白进行完整全长测序和定量监测。方法
58例新确诊患者，在接受ASCT移植前进行硼替佐米治疗，术后天继续服用来那度胺治疗，这些患者在经过相应的条件筛选之后接受后续的M蛋白测序和监测，其中26名患者入选最后的研究，其筛选条件为：
达到完全缓解（CR）状态的患者收集血清和尿液的IFE为阴性，且能连续收集到不少于8个时间点的样本。
术后天采集患者的血清和尿液样本，分别通过SPEP、IFE和sFLC法用于MRD检测。
后续的样本采集时间为术后1年以内，间隔为3个月/次。
之后则为6个月/次。
直至病情恶化。
M蛋白的检测通过Melon凝胶IgG纯化法从血清中分离得到IgG型M蛋白，同时对M蛋白进行定量下限测定（LLoQ）。
最后，所有样本通过质谱的方式确定M蛋白的氨基酸序列信息，并对M蛋白进行定量。
结果1.测定每位患者血液中的M蛋白全长氨基酸序列（表1），进行同源序列比对后确定每位患者的靶向定量肽段，每位患者平均获得6种特有的靶向定量肽段序列信息，其中LLoQ最低的的肽段被用于M蛋白定量监测（图1）。
表1：M蛋白测序的信息。M蛋白全序列中只提取CDR3区用于定量的肽段及其LOD和LLoQ值。HC表示重链，LC表示轻链。其中-样本定量检测的数据丢失，标记为NQ（non-quantifiabledata）。
图1：患者-重链特有的肽段AEDTAFYYCAK离子色谱峰图。横轴为保留时间（RetentionTime），纵轴为峰值强度（intensity）。
2.EasyM测量的M蛋白量与SPEP和IFE检测的M蛋白值趋势是一致的，但是EasyM的高灵敏度使M蛋白在常规方法无法定量的情况下仍能被检测和定量，显示EasyM方法可以更早的准确检出复发。
图2：该图显示了-复发患者的M蛋白水平。横轴为采集样本时间点，纵轴为M蛋白检出信息。在M18到M30的连续2次检测结果中，M蛋白的含量均有数倍上升，说明疾病在此期间复发，这比其他常规检测方法提前2-11个月检测到了复发。
3.在CR期，EasyM的检测结果显示有88.89%的样本被检测出M蛋白，而FLC只有63.25%，MFC则只有46.27%的样本被检测出M蛋白，显示出EasyM的检测结果更加灵敏。
表2：EasyM与MFC和FLC相比在可用的检测样本中的阳性检出率要更高。
4.比较了IFE阴性CR患者(n=21)和IFE阳性CR患者(n=5)的EasyM检测结果，在中位69.5个月的随访中，所有5名未检测到M蛋白的患者保持疾病无进展，而有检测到M蛋白的CR患者中28.6%(6/21)出现进展。我们与RapidNovor公司中国实验室已建立共同合作，为免疫球蛋白相关基因组、蛋白质组研发提供全面检测、信息服务。详情请咨询销售技术专家延伸阅读靶向肿瘤热点胞内突变的治疗性抗体是怎样研发的靶向肿瘤/病*胞内抗原的杀伤性抗体开发肿瘤/病*抗原HLA复合物蛋白测序预览时标签不可点收录于话题#个上一篇下一篇
